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技術(shù)文章
線粒體熒光探針(Mitochondria Probes)

搜索關(guān)鍵詞:

Cell apoptosis細(xì)胞凋亡;Mitochondrial membrane potential線粒體膜電位;MitoTracker;MitoSOX;JC-1;JC-10;Rhodamine 123;CAS:555-60-2;

 

基本介紹:

線粒體(Mitochondrial)是一種存在于大多數(shù)真核細(xì)胞中的由兩層膜包被的細(xì)胞器,約占細(xì)胞體積10%。作為一種多形細(xì)胞器,其結(jié)構(gòu)因細(xì)胞類型、細(xì)胞周期狀態(tài)意思胞內(nèi)代謝狀態(tài)而不斷變化。線粒體至關(guān)重要的功能是由氧化磷酸化(Oxphos)和脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的能量產(chǎn)生。線粒體內(nèi)還參與其他幾種代謝活動,包括尿素生成,血紅素和非血紅素鐵和類固醇生物起源,以及胞內(nèi)鈣離子(Ca2+)穩(wěn)態(tài)。線粒體還在凋亡中發(fā)揮重要作用。目前對線粒體參與生理功能的了解只有很少一部分,而對其作用機(jī)理和調(diào)控方式的了解就更少。

 

線粒體(Mitochondrial)的分布依據(jù)細(xì)胞能量水平而變化,是細(xì)胞類型、細(xì)胞周期狀態(tài)和增殖情況的一種功能表現(xiàn)。比如,褐色脂肪組織細(xì)胞,肝細(xì)胞和某些腎上皮細(xì)胞富集存在于活躍線粒體中,而靜息免疫系統(tǒng)祖細(xì)胞或前體細(xì)胞使用線粒體選擇性探針染色率很低。阿爾茨海默病線粒體數(shù)目減少,且其蛋白和核酸易被包括一氧化氮在內(nèi)的活性氧(ROS)所攻擊造成損傷。

 

我司提供一系列線粒體選擇性熒光探針和有機(jī)染料,能夠用來監(jiān)測細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞器功能。大多數(shù)線粒體選擇性有機(jī)染料的攝取依賴于線粒體膜電位。因此這些染料能讓研究者標(biāo)記線粒體活動、定位、含量,以及觀察一些能改變線粒體功能的某些藥物的生理效應(yīng)。

 

線粒體探針:

一、MitoTracker Probes(可固定的線粒體選擇性探針)

1)傳統(tǒng)線粒體探針的缺點:

傳統(tǒng)線粒體探針如羅丹明123(Rhodamine 123)雖然可立即聚集在功能線粒體上,然而,一旦線粒體膜電位喪失,這些探針就能很容易清洗掉離開細(xì)胞。當(dāng)碰到細(xì)胞需要進(jìn)行醛類固定或細(xì)胞內(nèi)含影響膜電位藥物的實驗中,這些探針則受到限制,不可使用。

 

2)MitoTracker線粒體探針的優(yōu)點

Mitotracker正克服傳統(tǒng)探針的缺點而被生產(chǎn),其能夠聚集在活線粒體上,并且細(xì)胞固定中也能良好維持。其中,Mitotracker orange,red,and deep red這三種探針經(jīng)透化(permeabilization)后仍能良好維持。在接下來免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)、原位雜交(ISH)或電鏡實驗的處理步驟中樣本仍保留線粒體的活細(xì)胞染色形態(tài)。另外,Mitotracker探針去除病原細(xì)胞線粒體染色可能遇到的一些問題,因為一旦線粒體染色后,細(xì)胞即可被固定然后進(jìn)行結(jié)果分析。

 

3)MitoTracker線粒體探針產(chǎn)品

我們提供7種Mitotracker探針,它們在光譜特性、氧化態(tài)以及可否固定幾個參數(shù)上有所差異,具體見下表。

貨號            

產(chǎn)品名稱                                                

Ex/Em(nm)         

是否可以固定      

氧化狀態(tài)           

Rosamine-based MitoTracker Probes

M7510

MitoTracker® Orange CMTMRos 橙色

554⁄576

Yes

Oxidized

M7511

MitoTracker® Orange CM-H2TMRos 橙色

554⁄576

Yes

Reduced

M7512

MitoTracker® Red CMXRos 紅色

579/599

Yes

Oxidized

M7513

MitoTracker® Red CM-H2XRos 紅色

579/599

Yes

Reduced

Carbocyanine-based MitoTracker Probes

M7514

MitoTracker® Green FM 綠色

490/516

No

N/A

M22425

MitoTracker®Red FM 紅色

581/644

No

N/A

M22426

MitoTracker® Deep Red FM 深紅色

644/665

Yes

N/A

【注1】:MitoTracker® Green FM(#M7514)在水溶液中無熒光;

【注2】:MitoTracker® Orange CM-H2TMRos(#M7511),MitoTracker® Red CM-H2XRos(#M7513)為還原態(tài)探針,無熒光。只有被氧化后才發(fā)熒光。

 

4)MitoTracker線粒體探針訂購信息

貨號              

產(chǎn)品名稱                                                   

規(guī)格               

報價(元)        

是否小包裝供貨   

M7510

MitoTracker® Orange CMTMRos 橙色

20x50 µg

3,868.00

M7511

MitoTracker® Orange CM-H2TMRos 橙色

20x50 µg

4,542.00

M7512

MitoTracker® Red CMXRos 紅色

20x50 µg

3,829.00

是(50 µg)

M7513

MitoTracker® Red CM-H2XRos 紅色

20x50 µg

4,562.00

是(50ug)

M7514

MitoTracker® Green FM 綠色

20x50 µg

3,843.00

是(50 µg)

M22425

MitoTracker®Red FM 紅色

20x50 µg

3,831.00

M22426

MitoTracker® Deep Red FM 深紅色

20x50 µg

3,833.00

是(50 µg)

以上所有產(chǎn)品均為Life(Invitrogen)原裝,原始包裝為20x50 µg(20支50µg單個包裝構(gòu)成)。我司對M7512,M7514,M22426進(jìn)行拆開銷售,特惠價為350元/支,單支50µg;對M7513,單支優(yōu)惠價格為400元?,F(xiàn)貨銷售,歡迎訂購。

 

二、MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator(線粒體超氧化物探針)

1)背景介紹

線粒體超氧化物(Mitochondrial superoxide)是氧化磷酸化的副產(chǎn)物。一條緊密偶聯(lián)的電子運傳遞鏈中約1-3%被消耗的線粒體氧不能*被還原,這些‘遺漏’的電子能與分子氧快速反應(yīng)產(chǎn)生超氧陰離子,即線粒體中含量zui高的活性氧(ROS)分子。細(xì)胞過氧化物生成量的增加在心血管疾病中得到闡釋,這些疾病包括高血壓、動脈粥樣硬化和糖尿病相關(guān)的血管損傷,以及神經(jīng)退化疾病如帕金森疾病,阿爾茨海默病和肌wei縮性[脊髓]側(cè)索硬化(ALS)。

 

2)產(chǎn)品描述

MitoSOX紅色線粒體超氧化物熒光探針(MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator)是二氫乙啶(dihydroethidum,DHE)的一種陽離子衍生物,特別設(shè)計高度特異性檢測活細(xì)胞線粒體超氧化物。

MitoSOX Red是一種特異性靶向活細(xì)胞線粒體的新型熒光探針,具細(xì)胞膜滲透性,且能快速和選擇性結(jié)合線粒體。一旦進(jìn)入線粒體,被超氧化物氧化,與核酸結(jié)合后產(chǎn)生很強(qiáng)的紅色熒光。MitoSOX Red能夠立即被超氧化物,并不是其他ROS-或RNS(活性氮)生成系統(tǒng)氧化。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)能夠預(yù)防MitoSOX Red被氧化。

MitoSOX Red可用于在對活細(xì)胞線粒體釋放的超氧化物的直接檢測中區(qū)別純化線粒體的人為誤差。另外,MitoSOX Red是一種有價值的工具,用來篩選多種疾病中調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激的藥物。

 

3)產(chǎn)品特點

• 容易為超氧化物而不是其他的ROS、RNS生成系統(tǒng)氧化

• 吸收波長⁄發(fā)射波長zui大值:~510⁄580 nm

• 用于活細(xì)胞成像

  快速選擇性靶向線粒體

 

4)MitoSOX Red訂購信息

貨號           

產(chǎn)品名稱                                                                 

規(guī)格              

報價(元)      

是否小包裝供貨 

M36008

MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 紅色

10x50 µg

3,855.00

是(50 µg)

以上所有產(chǎn)品均為Life(Invitrogen)原裝,原始包裝為10x50 µg(10支50µg單個包裝構(gòu)成)。我司對M36008進(jìn)行拆開銷售,特惠價為650元/支,單支50µg,現(xiàn)貨銷售,歡迎訂購。

 

三、JC-1/JC-10線粒體膜電位檢測探針(早期凋亡檢測)

1)背景介紹

線粒體膜通透性的改變是細(xì)胞早期凋亡發(fā)生的重要特征之一。

凋亡早期,線粒體膜通透性增加,線粒體蛋白包括:細(xì)胞色素C、Smac/DIABLO、HtrA2/OMI、核酸內(nèi)切酶G(EndoG)、凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)等,從線粒體基質(zhì)釋放到細(xì)胞漿。細(xì)胞色素C的釋放伴隨著線粒體膜電位的喪失,呼吸鏈障礙,鈣離子的釋放。

線粒體膜電位的破壞是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后zui早發(fā)生的胞內(nèi)事件,目前常用一些親脂性陽離子染料如JC-1,JC-10,羅丹明123(Rhodamine 123)等在線粒體膜電位變化中聚合形式的差異來區(qū)分正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞?;驹硎牵赫<?xì)胞中陽離子染料在線粒體中積累并聚合,聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光;凋亡細(xì)胞中由于線粒體膜電位的喪失,染料不能在線粒體中積累并以單體形式存在于胞漿中,單體發(fā)出綠色熒光。

 

2)產(chǎn)品描述

JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內(nèi),可以用來檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內(nèi),JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物,聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光(Ex=585 nm, Em=590 nm);不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失,JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中,產(chǎn)生綠色熒光(Ex=514 nm, Em=529 nm)。JC-1不僅可用于定性檢測,因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測,因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強(qiáng)度的比例來衡量。

JC-10是JC-1的升級產(chǎn)品,優(yōu)勢在其比JC-1具更好的水溶性,特別適合替代需要更好染料濃度的實驗。JC-10的檢測原理同JC-1。

 

3)訂購信息

貨號                      

產(chǎn)品名稱                                                                

規(guī)格                  

報價(元)        

MX3202-200UL

JC-1 (5 mg/ml in DMSO) 線粒體膜電位熒光探針

200μl (1mg)

600

MX3203-5MG

JC-1 (Powder) 線粒體膜電位熒光探針

5mg

2400

MX3204-100T

JC-1 線粒體膜電位檢測試劑盒

100T

780

MX3205-500UL

JC-10 (2mg/ml in DMSO) 線粒體膜電位熒光探針

500μl (1mg)

650

MX3206-5MG

JC-10 (Powder) 線粒體膜電位熒光探針

5mg

2600

MX3207-100T

JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒

100T

1600

 

4)相關(guān)產(chǎn)品(凋亡誘導(dǎo)劑)

線粒體凋亡研究中常需要陽性誘導(dǎo)劑建立陽性的凋亡模型,從而用于細(xì)胞凋亡機(jī)理或凋亡相關(guān)藥物的篩選。

CCCP,即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone,一種質(zhì)子載體(H+ionophore),是一種強(qiáng)效的線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑,促使線粒體內(nèi)膜對H+產(chǎn)生通透性,導(dǎo)致線粒體內(nèi)膜兩側(cè)的膜電位喪失,誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。也可作用于葉綠體膜,抑制光合作用;CCCP還可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體(ER-Golgi)之間的蛋白轉(zhuǎn)運,高親和力結(jié)合細(xì)胞色素C氧化酶。

FCCP,即Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone,一種質(zhì)子載體(H+ionophore),也是一種強(qiáng)效的線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑,促使質(zhì)膜和線粒體膜去極化。

貨號                     

產(chǎn)品名稱                                                           

規(guī)格                 

報價(元)       

MX3258-100UL

CCCP (50 mM) 凋亡誘導(dǎo)劑/質(zhì)子載體

100μl

320

MX3258-10MG

CCCP (Powder) 凋亡誘導(dǎo)劑/質(zhì)子載體

10mg

160

MX3259-100UL

FCCP (50 mM) 凋亡誘導(dǎo)劑/質(zhì)子載體

100μl

450

 

 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供產(chǎn)品。

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