1、過程概述
Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列用于細胞內鈣離子檢測時,F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為5μM。通常用含有5μM的Fluo-3 AM的適當溶液和細胞一起在37℃孵育30-60分鐘進行熒光探針裝載,隨后適當洗滌,洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內*轉變成Fluo-3。然后在流式細胞儀上進行檢測。
2、Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列使用液的配置
100ug的Fluo-3AM,分子量是1219.9。按實際需要的摩爾濃度折算,無水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲存液。如出現(xiàn)難溶現(xiàn)象,可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列使用注意事項:
1、熒光染料有淬滅問題,應盡量避光保存;
2、實驗時注意個人防護,戴手套、口罩;
Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列應用舉例
2、貯存液的配制(5000μM/L)
按照說明書,計算0.1mg 的摩爾數(shù)為0.089μM ,則需加DMSO18uL,微量加樣器反復吹打混勻后分裝,按說明書要求避光-20度冰凍保存。