大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析
簡要描述：
大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析 BL21 Star (DE3) 菌株來源于BL21(DE3)菌株，DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG用來誘導T7 RNA聚合酶的表達。
產(chǎn)品時間：2024-12-16
打印當前頁BL21 Star (DE3) Chemically Competent Cell
大腸桿菌化學感受態(tài)細胞
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產(chǎn)品標簽：
BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Rosetta (DE3)；表達感受態(tài)細胞；pET表達載體；IPTG誘導；
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2334-1000UL | BL21 Star (DE3) Competent Cell大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 450 |
MF2334-5000UL | BL21 Star (DE3) Competent Cell大腸桿菌化學感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1880 |
【好消息】：見我司整理的BL21系列表達感受態(tài)細胞常見問題。
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2334-1000UL | MF2334-5000UL | ||
MF2334-A | BL21 Star (DE3) Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2334-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21 Star (DE3) 菌株來源于BL21(DE3)菌株，DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG用來誘導T7 RNA聚合酶的表達。該菌株攜帶一突變的rne基因（rne131），編碼合成截短的RNase E，此酶喪失mRNA降解能力從而提高mRNA轉錄體的穩(wěn)定性和增加蛋白產(chǎn)量。另外，BL21 Star (DE3)是大腸桿菌B/r菌株，缺乏lon和外膜蛋白酶OmpT，降低外源重組蛋白的被降解，進一步增加了蛋白表達率。BL21 Star (DE3) 菌株特別設計適用于低拷貝，T7啟動子表達載體的非毒性蛋白的高水平表達。與BL21菌株相比， mRNA穩(wěn)定性提高，BL21 Star菌株由于提高的mRNA穩(wěn)定性，呈現(xiàn)出更高的異源基因基礎表達，因此不適合毒性蛋白表達。
BL21 Star (DE3) 菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3)
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌BL21 Star (DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，六個月有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2） 最好在冰上融化感受態(tài)細胞。
3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。
4） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。
5） 產(chǎn)品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。
6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】
1） 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管內，置于冰浴中。【注意：一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一?！?/p>
以下實驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。
2） 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻（或用手輕彈管輕輕混勻），冰浴靜置30min。
3） 42℃熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。
4） 向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5） 根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
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MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸鏈mei素 | 25g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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